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免疫印迹(Western Blot)的基本原理、实验步骤

简介:Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,探针是抗体,显色用标记的二抗。SDS-PAGE可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC 膜就称为一个印迹(blot),用蛋白溶液(如5%BSA或脱脂奶粉溶液)处理,封闭NC 膜上的疏水结合位点。用目标蛋白的抗体(一抗)处理NC 膜只有待研究的蛋白质才能与一抗特异结合形成抗原抗体复合物,这样清洗除去未结合的一抗后,只有在目标蛋白的

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